JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 2:51 min • November 28th, 2025
Tomemos el cultivo de una bacteria genéticamente modificada diseñada para albergar un plásmido que expresa una proteína fluorescente secretora y confiere resistencia a los antibióticos.
Inocúlala en un medio que contenga el antibiótico e incuba con agitación para favorecer el crecimiento bacteriano.
El antibiótico garantiza que solo las células que retienen el plásmido puedan proliferar.
Una vez que el cultivo alcanza la densidad deseada, transfiere a un sistema automatizado de manipulación de líquidos.
Una placa de pozo profundo contiene concentraciones variables de nutrientes esenciales, que se dispensan en una placa de microtitulación para crear formulaciones de medio distintas.
Inocula cada pozo de la placa con el cultivo bacteriano.
Sella la placa y colócala en un microbioreador, que mantiene una temperatura y aireación uniformes.
Las diferentes formulaciones provocan variaciones en el crecimiento bacteriano y la secreción de proteínas fluorescentes.
Un sensor óptico en el dispositivo mide la densidad y fluorescencia celular, permitiendo comparar el crecimiento bacteriano y la producción de proteínas fluorescentes entre las formulaciones del medio.
Esteriliza las placas de pozo profundo para almacenamiento de soluciones en stock sobre una mesa de trabajo limpiando las placas con un 70 % de etanol y posteriormente secándolas en una campana de flujo laminar. Comienza el cultivo de semillas inoculando 50 mililitros de medio BHI que contenga 25 miligramos por litro de kanamicina con una alicota del banco de células de trabajo. Coloca todo el material de laboratorio necesario sobre la mesa de trabajo robótica y vierte las soluciones de stock en el material correspondiente.
Luego, inicia el flujo de trabajo robótico para la preparación del medio para que el último paso, que es la inoculación, se alcance a tiempo para el inicio del cultivo de semillas. Muestrea el cultivo de semillas tras aproximadamente dos horas para monitorizar el crecimiento midiendo la densidad óptica a 600 nanómetros o OD600. Sigue monitorizando el crecimiento cada hora.
Tras aproximadamente cinco horas, el cultivo alcanza un OD600 entre tres y cuatro, y se utiliza para inocular los cultivos principales. Coloca el cultivo de semillas sobre la mesa de trabajo del manipulador de líquidos y continúa con el protocolo de preparación del medio. Sella las placas de microtitulación de cultivo tras la inoculación.
A continuación, coloca el MTP sellado de cultivo en el dispositivo Biolector. Luego, inicia el protocolo de cultivo predefinido.