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Microbiología
0 vistas • 2:35 min • November 28th, 2025
Comienza inoculando un lazo de una cepa cianobacteriana sobre un medio de crecimiento. Incuba para permitir que las células crezcan hasta la densidad deseada.
Lava las células mediante centrifugación y descarta el sobrenadante que contiene metabolitos residuales y restos.
Resuspende el pellet en un pequeño volumen de medio de crecimiento para crear una suspensión concentrada.
Mezcla una alicuota de esta suspensión con glicerol, un crioprotector que estabiliza la membrana y evita la formación de cristales de hielo durante la congelación.
A otra cuocua, añade dimetilsulfóxido, un crioprotector que penetra en las células e inhibe la nucleación del hielo.
Almacena las muestras a bajas temperaturas, donde la actividad metabólica se detiene y las células permanecen viables durante largos periodos.
Para reactivar, raspa una pequeña cantidad de biomasa congelada sobre una placa de agar sin antibióticos y haz una raya para reducir el estrés y favorecer una recuperación gradual.
Este método permite la criopreservación a largo plazo y la reactivación de cepas cianobacterianas para futuros estudios.
Para almacenar las cepas a largo plazo, se prepara un cultivo fresco de la cepa inoculando un lazo lleno de células en 30 a 50 mililitros de medio BG11. Cultiva el cultivo durante tres o cuatro días hasta un OD750 igual a 0,4 a 0,7.
Después de usar BG11 para lavar las células una vez, resuspende el pellet en aproximadamente dos mililitros de BG11. Añade 0,8 mililitros de las celdas concentradas a un solo tubo. Luego añade 0,2 mililitros de glicerol esterilizado al 80% con filtro.
A otro tubo, añade 0,93 mililitros de células concentradas y 0,07 mililitros de DMSO. Guarda ambos tubos a menos 80 grados Celsius. Para reactivar las cepas, retira el tubo y usa un palillo romo para raspar algunas células de una placa de agar sin antibióticos. Luego usa un lazo estéril para que salga como de costumbre.