Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:22 min. • January 30th, 2026
Tomemos glóbulos rojos de oveja (SRBCs) con IgM-opsonizados con anticuerpos IgM unidos a los antígenos de la superficie celular.
Añade suero que contenga proteínas del complemento excepto C5.
El complejo C1 se une a los anticuerpos y se activa en el conjunto.
El C1 activado parte C4 y C2, formando C3 convertasa, que luego parte C3 y deposita C3b en los SRBCs.
Sin C5, C3b se degrada a C3bi.
Añade los SRBCs a un cultivo de macrófagos.
C3bi se une al receptor de macrófagos, desencadenando la fagocitosis de SRBC.
Añade una solución hipotónica para lisar y elimina los SRBC no internalizados.
Añade un tampón de lisis para lisar las células y libera hemoglobina SRBC.
Introduce un reactivo de detección.
En presencia de urea, la hemoglobina cataliza la oxidación del diaminofluoreno por peróxido de hidrógeno, produciendo un producto coloreado.
Mide la absorbancia del producto coloreado, que es proporcional a las SRBC fagocitadas.
Este ensayo modela la fagocitosis de bacterias marcadas con anticuerpos utilizando SRBCs opsonizados para imitar objetivos bacterianos.
Para un ensayo de opsonización, incubar 2 veces 10 hasta el octavo glóbulos rojos de oveja o SRBCs con 50 microlitros de inmunoglobulina anti-S
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