Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 4:19 min. • February 2nd, 2026
Toma una placa de cultivo con larvas de Caenorhabditis que albergan las bacterias de interés que colonizan su lumen intestinal.
El plato contiene una cepa bacteriana conocida como alimento. Matar de hambre a los gusanos para que consuman todas las bacterias y entren en una fase de latencia.
Añade un medio y transfiere los gusanos a un tubo.
Centrifuga y descarta el sobrenadante.
Añade una solución detergente, agita para eliminar las bacterias adheridas a la superficie, centrifuga de nuevo y desecha el sobrenadante.
Repite el lavado y luego transfiere los gusanos a una placa de cultivo fresca.
Permite que el gateo elimine bacterias alimentarias débilmente unidas de la superficie y del lumen intestinal, mientras retienes las bacterias de interés que colonizan el intestino de forma estable.
Repite el paso de transferencia y arrastre para asegurar la eliminación completa de las bacterias alimentarias.
Añade el medio, transfiere los gusanos a un cristal de reloj y disecciona para exponer sus intestinos.
Diseca los intestinos que contienen las bacterias de interés, recóllalos en tubos llenos de agua y congela para su uso futuro.
Para privar de hambre a los gusanos y reducir el número de bacterias OP50-1, incuba los nematodos a 20 grados Celsius durante tres o cuatro días. Añade 5 mililitros del medio M9 a la placa de gusanos recientemente hambrientos, y luego transfiere el medio y los gusanos M9 a un tubo centrifugador estéril de 15 milímetros para centrifugar a 1.000 veces g durante 30 segundos a temperatura ambiente.
Retira el sobrenadante antes de lavar los gusanos cinco veces con 10 mililitros de M9 que contiene 0,05% de Triton X-100 en un Nutator durante 20 minutos. Tras el último lavado, retira el sobrenadante sin alterar el pellet en 100 microlitros de solución y transfiere el M9 y los gusanos a una placa NGM de 6 centímetros sin siembra. Deja que la placa se seque mientras los gusanos se arrastran durante 20 minutos para ayudar a eliminar el OP50-1 de la cutícula y el intestino.
Cuando la placa esté seca, repite el procedimiento añadiendo 250 microlitros de M9 y transfiriendo las lombrices a una nueva placa NGM de 6 centímetros sin sembrar para permitir que las lombrices se arrastren mientras la placa se seca.
Tras 20 minutos, añade 250 microlitros de la M9 a la placa y transfiere 100 microlitros de la M9 junto con los gusanos a un cristal limpio.
Luego decapita los nematodos usando una aguja de jeringuilla calibre 26 mientras sujetas el gusano con otra aguja de jeringuilla calibre 26.
Una vez decapitado, el intestino, una masa granular y la gónada transparente se alejan naturalmente del cuerpo del nematodo, luego cortan un trozo del intestino expuesto y transfieren un intestino disecado a un tubo PCR de 0,5 mililitros que contiene 10 microlitros de agua estéril. Repite el procedimiento para recoger intestinos de al menos cinco animales diferentes en tubos PCR.
Congela los tubos de PCR a menos 80 grados Celsius durante un mínimo de 5 minutos. Descongela las muestras de intestino antes de proceder con la PCR y la secuenciación para su identificación.