Hibridación fluorescente in situ de bacterias intestinales en secciones intestinales de ratón

Comienza añadiendo una solución que contiene sondas bacterianas de hibridación in situ (FISH) específicas de ARNr 16S a una lámina que contiene las secciones intestinales del ratón colonizadas por bacterias.

Colocar un abrigo para dispersar las sondas que contienen el líquido y evitar la evaporación.

Incubar el portaobjetos en una cámara humidificada a una temperatura elevada.

Esto despliega la estructura secundaria del ARN, facilitando la hibridación de la sonda con secuencias complementarias en el ARNr bacteriano 16S.

Retira el abrigo y incuba la lámina en un amortiguador de lavado precalentado para eliminar las sondas sueltas.

Enjuaga con un tampón de fosfato para mantener el pH fisiológico.

Aplica un contratinte que contenga un tinte específico para mucosidad y un colorante nuclear, y incuba.

Estos tintes se unen selectivamente al moco intestinal y al ADN de las células bacterianas y hospedadoras. Lava la corredera con un buffer y monta las cubiertas sobre la corredera usando medios de montaje.

Bajo un microscopio confocal, observa bacterias marcadas como FISH, células intestinales y la capa mucosa en las secciones.

Crea círculos muy cerrados alrededor de cada sección de tejido utilizan