Aislamiento y cultivo de Caenorhabditis elegans - Bacterias asociadas

Comienza con una placa de varios pozos que contiene cuentas estériles y amortiguador en cada pozo.

Añade un nematodo de C. elegans a cada pozo para aislar su comunidad bacteriana.

Utilizando un homogeneizador, se alteran mecánicamente los nematodos para liberar las bacterias en el tampón.

Centrifugar para separar los restos celulares y recoger el sobrenadante que contiene las bacterias.

Coloca la solución bacteriana diluida en placas selectivas de agar nutritivo con composiciones variables para favorecer el crecimiento de diversos tipos bacterianos.

Incuba las placas para permitir que las bacterias se multipliquen y formen colonias visibles.

Usando un lazo estéril, elige una sola colonia aislada y ponla en una placa nueva del mismo medio.

Incuba las placas para permitir el crecimiento de colonias bacterianas puras.

Inocular cada colonia pura en el medio líquido correspondiente e incubar.

Estas bacterias crecen hasta convertirse en cultivos puros, cada uno representando una especie bacteriana naturalmente asociada a C. elegans.

Para aislar la bacteria, prepara una placa de 96 pozos con aproximadamente tres perlas estériles de 1 milímetro, 20 microlitros de tampón M9 por pozo y haz una pipeta