Aislamiento de células epiteliales de la vejiga del ratón que contienen comunidades bacterianas intracelulares

Comienza con células epiteliales de la vejiga raspadas de una vejiga de ratón infectada con E. coli uropatógeno marcado con fluorescente.

Durante la infección, estas bacterias invaden las células epiteliales y forman comunidades bacterianas intracelulares, o IBCs, estructuras similares a biopelículas que las protegen de las defensas inmunitarias del huésped.

Bajo un microscopio disecador, identificar los IBC como grandes agregados fluorescentes confinados dentro de células epiteliales individuales.

Montar un sistema de micropipeteo bucal utilizando un capilar de vidrio estirado conectado a una pipeta aspiradora para aislar células epiteliales individuales que contienen IBC.

Sumerge brevemente la punta capilar en PBS para reducir la absorción de líquidos impulsada por los capilares.

Coloca el capilar cerca de la célula epitelial fluorescente seleccionada y aplica una succión suave para atraer una sola célula que contenga IBC, evitando células no infectadas y bacterias extracelulares.

Expulsa la célula en un tubo microcentrífuga estéril usando una ligera presión positiva, preservando la viabilidad bacteriana.

Este método permite aislar células epiteliales que albergan IBCs para el análisis