Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:55 min. • February 2nd, 2026
Empieza con un stock congelado de Mycobacterium tuberculosis, una bacteria patógena que causa tuberculosis pulmonar.
Descongela el frasco y mezcla suavemente la suspensión para dispersar los grumos bacterianos y asegurar una concentración uniforme.
Diluir el volumen requerido en un tampón estéril para preparar un inoculo aerosol estandarizado.
Sujeta al ratón en un soporte de malla para limitar el movimiento y colócalo dentro de la cámara de exposición de aerosoles sellada.
Carga el inóculo preparado en una jeringuilla e inyectarlo en la unidad nebulizadora acoplada a la cámara.
Activa el sistema de inhalación, que utiliza aire comprimido para nebulizar la suspensión en gotas finas y respirables.
Estas gotas, que contienen M. tuberculosis viable, se dispersan en el aire de la cámara.
El ratón consciente inhala el aerosol, permitiendo que las bacterias viables penetren profundamente en los pulmones e inicien la infección.
El modelo murino de tuberculosis pulmonar ya está listo para estudios posteriores.
Comienza calentando las reservas de Mycobacterium tuberculosis de un título conocido de UFC. Cuando las células se hayan descongelado, utiliza una jeringuilla de 1 mililitro equipada con una aguja calibre 27 para mezclar cuidadosamente la suspensión cinco veces y dispersar los grumos bacterianos, evitando la producción de aerosoles. Dependiendo de la dosis de infección deseada, transfiere el volumen requerido del material micobacteriano a un tubo de 50 mililitros que contiene PBS estéril hasta un volumen final de 6 mililitros. A continuación, coloca los animales experimentales individualmente en cestas de malla compartimentadas. Coloca las cestas en la cámara circular de aerosoles y cierra la tapa de la cámara.
Fije la unidad nebulizadora Venturi a las tres juntas de vaso de acero inoxidable. Aspira la suspensión micobacteriana en una jeringuilla de 10 mililitros, equipada con una aguja roma calibre 18, y lleva la jeringuilla a la cámara de aerosoles en una caja de transporte cerrada. Ahora retira el tapón de rosca del nebulizador e inyecta cuidadosamente la suspensión de micobacterias en la unidad, evitando la generación de aerosoles.
Descarta la jeringuilla en un recipiente para objetos punzantes que contenga un 2% de Buraton y luego sella el nebulizador.
Ejecuta el aparato de inhalación.
Cuando el ciclo termine, confirma que la suspensión de micobacterias ha sido completamente nebulizada.