Imagen bioluminiscente de infecciones bacterianas en ratones

Observemos un ratón anestesiado con incisiones en la piel infectado con una bacteria patógena.

La bacteria está genéticamente modificada para portar un plásmido que contiene el sistema reportero luxABCDE , que permite una bioluminiscencia autónoma.

Coloca al ratón en posición prona sobre la plataforma de imagen de bioluminiscencia.

En el lugar de la infección, los genes luxA y luxB de la bacteria codifican la enzima luciferasa, mientras que los genes luxCDE codifican enzimas que sintetizan aldehídos grasos de cadena larga, que sirven como sustrato para la luciferasa.

En presencia de oxígeno, la luciferasa cataliza la oxidación de su mononucleótido de cofactor, la flavina reducida, que luego reacciona con el aldehído graso de cadena larga, produciendo luz azul-verde.

Esta bioluminiscencia indica la presencia de bacterias metabólicamente activas en el lugar de la infección.

Utilizando el sistema de imagen, se puede imaginar el sitio de infección y cuantificar la intensidad de la señal de bioluminiscencia.

Para la imagen in vivo de las heridas infectadas, sigue los protocolos de contención de nivel dos de bioseguridad para el transporte de los ratones hacia y desde el instrumento de imagen y coloca al ratón anestesiado en posición prona dentro de la cámara de imagen.

En el software de imagen, ajusta el tiempo de exposición, el binning, el f-stop y el campo de visión según corresponda al experimento.

A continuación, crea una región de interés en el lugar de la herida y mide el flujo medio detectado en fotones por segundo.

Para medir el fondo, crea una región de interés sobre un área aleatoria en la plataforma de imagen y resta el número de fondos de fotones por segundo.