Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:12 min. • January 30th, 2026
Tomemos una mezcla que contenga volúmenes iguales de dos suspensiones de Agrobacterium tumefaciens , cada una portando un plásmido: uno codifica GFP y el otro codifica una proteína efectora.
Perfora un agujero y utiliza una jeringuilla sin aguja para infiltrar la mezcla en la superficie inferior de hojas sanas y completamente expandidas de Nicotiana benthamiana 16c.
Seca cualquier exceso de suspensión con tejido blando para evitar el crecimiento bacteriano excesivo.
Marca las zonas infiltradas e incuba las plantas en condiciones óptimas de crecimiento.
Agrobacterium transfiere el ADN plasmídico a las células vegetales, donde los genes GFP y efectores se transcriben en ARNm y se traducen en proteínas.
El sistema de defensa de la planta utiliza silenciamiento de ARN, donde los siRNA dúplex se cargan en RISC. Se retira la hebra pasajera, y la hebra guía dirige al complejo para degradar el ARNm de GFP objetivo.
Sin embargo, las proteínas efectoras se unen a los siARN, impidiendo su asociación con RISC y permitiendo que la fluorescencia de GFP persista.
Esto permite identificar efectores patógenos que suprimen el silenciamiento del ARN vegetal.
Mezcla volúmenes iguales de un cultivo de Agrobact
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