Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:29 min. • February 2nd, 2026
Comienza con embriones transgénicos de pez cebra que expresan macrófagos marcados con fluorescencia, montados en agarosa de baja fusión en una placa de imagen.
Estos embriones se infectan con Mycobacterium marinum marcado fluorescentemente mediante microinyección intramuscular en el mesencéfalo, iniciando una respuesta inmune localizada.
Cubrir la agarosa solidificada con medios embrionarios que contienen fármacos anestésicos para mantener la anestesia e inhibidores químicos para suprimir la pigmentación, asegurando claridad óptica para la imagen.
Coloca el plato en la cámara ambiental de un microscopio confocal de alta resolución.
Utilizando iluminación de campo claro, localiza la región infectada.
Activa los canales láser de fluorescencia, ajusta las posiciones de inicio y fin de la pila Z e inicia la imagen en time-lapse.
Visualiza el macrófago infectado, lleno de bacterias fluorescentes, mientras se vuelve redondeado e inmóvil.
Esto indica la degradación del citoesqueleto y el inicio de la muerte celular lítica.
Con el tiempo, el macrófago se hincha y se rompe, liberando contenido citoplasmático y bacterias internalizadas en el tejido circundante, una característica distintiva de la muerte inflamatoria de las células líticas.
Una vez que la agarosa se ha solidificado completamente, cúbrela con una capa de agua de huevo. Después de montar la cámara ambiental, coloca el plato de fondo de cristal de 35 milímetros junto con el pez cebra en la cámara ambiental. Abre el diodo de 405, el argón al 20% de potencia y el láser DPSS de 561 nanómetros. Configura la potencia láser adecuada en los ajustes de espectro.
Elige el modo de adquisición "XYZ" y "Escaneo secuencial " y configura el formato de imagen en "512 por 512 píxeles". Cambia a "Modo de Datos en Vivo", apunta a la posición del primer pez cebra y marca la posición "Inicio" y "Fin" Z. Repite este proceso para cada uno de los embriones restantes. Añade una "pausa" al final del programa. Define el bucle y el ciclo del programa, y guarda el archivo.