Evaluación in vitro de la muerte bacteriana por fagocitos esplénicos neonatales de ratón

Comienza disociando mecánicamente los bazos neonatales de ratón para generar una suspensión unicelular.

Transfiere la suspensión a un tubo, centrifuga y retira el sobrenadante.

Suspende el pellet en un tampón de lisis para eliminar los eritrocitos.

Añade el buffer, centrifuga de nuevo y quita el sobrenadante.

Suspender las células en buffer e incubarlas con microperlas magnéticas recubiertas de anticuerpos que apunten a un receptor expresado en neutrófilos y monocitos inflamatorios.

Centrifuga y retira las perlas sueltas. Añade buffer, luego pasa la suspensión a través de una columna ferromagnética y aplica un campo magnético para conservar las celdas unidas a la perla.

Elimina el campo magnético, eluye las células con un tampón y siembralas en una placa de varios pozos.

Añade concentraciones crecientes de bacterias luminiscentes a pozos seleccionados.

Incubar para permitir que neutrófilos y monocitos interioricen las bacterias mediante fagocitosis.

Sustituye el medio por medio que contenga antibióticos para eliminar bacterias no internalizadas.

Registrar la luminiscencia a intervalos regulares para evaluar la internalización bacteriana y la posterior muerte inducida por la fagocitosis.

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