JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 3:45 min • February 2nd, 2026
Comienza con cachorros de ratón neonatal con edades iguales.
Levanta suavemente la piel en la nuca de cada cachorro. Inyecta subcutáneamente a un cachorro una suspensión de bacterias patógenas de baja concentración y otro con una suspensión de alta concentración.
Estas bacterias expresan un operón bioluminiscente que produce la enzima luciferasa y su sustrato, permitiendo la emisión autónoma de luz.
Una cápsula protectora de polisacáridos rodea a las bacterias y enmascara sus antígenos superficiales, impidiendo que las células inmunitarias de las crías la reconozcan.
Devuelven a los cachorros a su madre biológica para el cuidado postnatal.
La proliferación bacteriana en el lugar de inyección desencadena inflamación y un aumento de la permeabilidad vascular, permitiendo la entrada bacteriana en el torrente sanguíneo y la propagación sistémica.
Coloca a los cachorros anestesiados bajo un sistema de imagen por luminiscencia.
La luciferasa oxida el sustrato para producir luz visible, permitiendo la visualización de bacterias dentro de las crías.
Toma imágenes a lo largo del tiempo para comparar el crecimiento y la propagación bacteriana en crías inoculadas con concentraciones bacterianas altas y bajas.
Comienza colocando a los cachorros con edades iguales en grupos de camada de dosis altas o bajas dentro de un armario de bioseguridad nivel dos. En el día 3 o 4 postnatal, anota el peso de todos los cachorros antes de la inoculación.
Carga las jeringuillas de insulina con PBS o con la dosis alta o baja de E. El inóculo Coli Lux en el armario de bioseguridad y coloca las jeringuillas cargadas sobre hielo.
Coloca al recién nacido a inyectarlo sobre una superficie limpia dentro del armario de bioseguridad y eleva la piel en la nuca como si quisieras abrazar al cachorro. Inserta el bisel de la aguja justo debajo de la piel, en el espacio creado entre la piel y el músculo. Cuando la aguja se siente bajo la piel, inyecta 50 microlitros del inoculante mientras liberas simultáneamente la parte pellizcada de la piel para evitar el reflujo de la piel. Luego, retira la aguja despacio y con cuidado.
Cuando todos los cachorros hayan sido inyectados de la misma manera, devuelven a sus madres. Inmediatamente después de la inyección y en los momentos experimentales adecuados, coloca la jaula con E. ratones neonatales infectados con coli lux y se conectan a una campana de flujo laminar de nivel dos de bioseguridad y abren el software en el ordenador de micro TC. Tras inicializar el sistema y esperar a que la temperatura de la etapa se bloquee a 37 grados Celsius y la temperatura CCD a -90 grados Celsius, coloque hasta cuatro PUP anestesiados sobre la caja de imagen de la cámara de imagen en posición prona.
Cierra la puerta de la cámara de imagen y selecciona la opción de imagen luminiscente. Selecciona el filtro abierto y siguiente, y configura el filtro de excitación en bloque y el filtro de emisión en abierto. Selecciona 500, 520, 560, 580, 600 y 620 nanómetros.
Luego, haz una imagen de los cachorros antes de devolverlos a la jaula con la madre, con supervisión hasta la recuperación de la anestesia.