Detección in situ de bacterias en secciones de tejido gingival de ratón

Toma una sección gingival de ratón infectada con bacterias patógenas, pretratada para acceder al ADN bacteriano.

Aplica un tampón con una sonda de ADN marcada con digoxigenina dirigida al ADN bacteriano.

Coloca una funda y sella para evitar la deshidratación de la muestra.

Introduce calor para desnaturalizar el ADN y luego incuba bajo condiciones calurosas y húmedas para permitir la hibridación con sonda.

Enfría la corredera y quita la cubierta, y lava varias veces con buffer para eliminar las sondas sueltas.

Añade una solución bloqueante para evitar la unión inespecífica de anticuerpos.

Incubar con anticuerpos conjugados con enzimas que se unen a la digoxigenina.

Lava para eliminar los anticuerpos no unidos.

Añadir un inhibidor para inactivar selectivamente la enzima endógena.

Aplica un sustrato que reaccione con la enzima para dar un precipitado de color.

Enjuaga con agua para eliminar el exceso de sustrato.

Añade un tinte para teñir los núcleos.

Lava para eliminar el exceso de tinte.

Deshidrata en etanol y trata con xileno para aumentar la transparencia del tejido.

Monta la sección.

Bajo un microscopio, visualiza las bacterias dentro de la sección.

Empieza el trabajo in situ sumergiendo primero