Preparación de cultivo de Agrobacterium para la entrega de genes en células vegetales

Comienza con un cultivo de Agrobacterium tumefaciens cultivado en medio suplementado con dos antibióticos para evitar la contaminación y asegurar la retención de plásmidos.

Las bacterias contienen un vector de expresión vegetal que transporta un gen de interés y un gen de resistencia a los antibióticos.

También contienen un plásmido auxiliar con una región de genes de virulencia necesaria para llevar el gen de interés a las células vegetales.

Transfiere una porción a un tubo que contenga un medio tamponado suplementado con acetosiringona, una molécula señal de origen vegetal, y los antibióticos. Incuba con el sacudido.

La acetosiringona se difunde dentro de la célula, activa una vía de señalización y activa la expresión de genes de virulencia necesarios para la transferencia del gen de interés.

Transfiere el cultivo, centrifuga para recoger las bacterias y desecha el sobrenadante.

Añade un tampón de sal y lava las células repetidamente para eliminar los antibióticos añadidos.

Resuspende las bacterias en el tampón con acetosiringona e incuba sin agitar para mantener la expresión génica de virulencia.

Utiliza la cultura inmediatamente para una transformación eficiente.

Utiliza una punta para