Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:43 min. • February 2nd, 2026
Comienza con una placa selectiva de agar nutritivo suplementada con sangre que contiene glóbulos rojos.
Traza Staphylococcus aureus (S. aureus), una bacteria patógena Gram-positiva, sobre el agar e incuba.
Durante la incubación, las bacterias utilizan nutrientes, crecen y forman colonias.
S. aureus secreta hemolisina, una toxina formadora de poros que lisa los glóbulos rojos del agar y produce zonas claras y transparentes alrededor de las colonias, indicativa de hemólisis.
Selecciona una colonia hemolítica, inocúlala en un caldo nutritivo e incuba bajo condiciones rotativas para favorecer el crecimiento bacteriano.
Utilizando un espectrofotómetro, mide la densidad óptica (OD) para determinar la concentración bacteriana.
Según la lectura de sobredosis, transfiere una alicuota a un caldo fresco de nutrientes para diluir las células e incuba en un baño maria con agitación.
Mide el OD a intervalos regulares.
Un OD cercano a 0,8 indica que las bacterias han alcanzado la fase de crecimiento exponencial con una fisiología uniforme.
Este hemolítico S. aureus está listo para estudios de interacción huésped-patógeno.
Empieza por hacer una racha con S. cepas aureus de interés en placas de agar sanguíneo a partir de un stock de glicerol congelado e incubando las placas a 37 grados Celsius durante 16 a 24 horas para confirmar sus fenotipos hemolíticos basados en su capacidad para lisar glóbulos rojos y formar zonas transparentes claras.
Inocular aislados de colonia única de cada cepa en 4 mililitros de caldo de soja tríptico, o TSB, en tubos de vidrio estériles y rotar los tubos a 37 grados Celsius durante 16 a 24 horas en un rodillo de tubos en un ángulo de aproximadamente 70 grados y 70 rotaciones por minuto. A la mañana siguiente, mide la densidad óptica a 600 nanómetros, o diámetrode 600, de los cultivos en un espectrofotómetro y diluye las células a un diámetrode 600 de 0,05 en 25 mililitros de TSB estéril a una proporción de 5 a 1 matraz por volumen en matrazos DeLong de 125 mililitros. Incubar los cultivos en un baño maria a 37 grados Celsius a 280 rotaciones por minuto.