Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 1:35 min. • January 30th, 2026
Comienza con tubos que contienen la etapa persistente no replicante, o NRP, de Mycobacterium tuberculosis, que presenta una capa externa engrosada.
Añade perlas de vidrio a un tubo y agita para alterar mecánicamente la capa externa de las micobacterias, aumentando la permeabilidad.
Después, transfiere la suspensión micobacteriana batida por la perla a un tubo nuevo.
Añade rifampicina marcada con fluorescente, un antibiótico antituberculoso, tanto a las suspensiones celulares sin tratar como a las que están batidas por perlas.
Incubar con agitación para permitir que la rifampicina marcada con fluorescencia entre en las micobacterias.
Con el tiempo, más rifampicina entra en las micobacterias.
Centrifuga las muestras para separar las células y eliminar el sobrenadante que contiene rifampicina no unida.
Resuspende las micobacterias en un medio fresco.
Analizar las muestras mediante citometría de flujo. A medida que las células atraviesan un haz láser, emiten fluorescencia proporcional a la rifampicina fluorescente intracelular.
En diferentes momentos de tiempo, las células NRP no tratadas muestran menor fluorescencia que las células batidas por perlas.
Esto indica que la capa externa engrosada restringe la entrada de rifampicina, apoyando la persistencia bacteriana durante la interacción huésped-patógeno.