Ensayo microfluídico basado en fagos para detectar E. coli viable en muestras de agua

Comienza con una muestra de agua contaminada que probablemente contenga coliformes fecales, incluyendo E. coli.

Realizar una dilución en serie en agua destilada para reducir la turbidez y la carga microbiana.

Mezcla la muestra diluida deseada con el medio nutritivo y cárgala en un chip microfluídico.

Utiliza filtración al vacío para capturar bacterias en una membrana dentro del canal serpentino del chip.

Añade medio nutritivo a la cámara superior e incuba para mejorar la recuperación bacteriana.

Sustituye el medio por una solución de fagos específicos de E. coli que portan el gen de la luciferasa.

Incubar para permitir la infección por fagos, donde el ADN del fago se replica, degrada el ADN del huésped y forma nuevos fagos junto con la producción de luciferasa. Luego, las células infectadas se lisan para liberar la luciferasa.

Aplica filtración al vacío para transferir la luciferasa a una membrana de captura.

Añade un sustrato que reaccione con la luciferasa para generar una señal luminiscente.

Utilizando un tubo fotomultiplicador, mide la luminiscencia, que es proporcional al número de células viables de E. coli en la muestra de agua.