JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 1:36 min • January 30th, 2026
Toma un cultivo adherente de macrófagos murinos.
Trata bien la prueba con un buffer que contiene Wnt5A, una molécula de señalización, y el control solo con buffer.
Infecta con un patógeno bacteriano e incuba.
En las células de prueba, Wnt5A activa una cascada de señalización que mejora la reorganización del citoesqueleto para potenciar la captación bacteriana en los fagosomas, mientras que las células de control que carecen de esta señalización internalizan menos bacterias.
Lavar para eliminar bacterias no internalizadas y luego incubar con un medio que contenga antibióticos para eliminar las bacterias extracelulares restantes.
La señalización Wnt5A prepara los fagosomas que contienen bacterias para la fusión con lisosomas, lo que permite la degradación bacteriana.
Algunas bacterias escapan rompiendo los fagolisomas.
En las células de control, la maduración limitada del fagosoma conduce a un aumento de la fuga.
Cosecha las células en momentos de tiempo definidos. Añade agua destilada para inducir el shock osmótico, lisando las células y liberando bacterias intracelulares.
Extiende los lisados sobre placas de agar e incuba.
Contar colonias para evaluar el mayor declive bacteriano dependiente del tiempo en células tratadas con Wnt5A.