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Comienza con una placa de medio de crecimiento nematodo rica en nutrientes que contiene un césped de la bacteria patógena Aeromonas.
Transfiere gusanos C . elegans en estadio L4 que expresan GFP específico del músculo al césped bacteriano e incubar.
Los gusanos ingieren bacterias junto con nutrientes. Esto permite que las bacterias lleguen y colonizen el intestino.
Utilizando un sistema especializado de secreción, Aeromonas administra factores de virulencia a las células intestinales del gusano.
Estos factores de virulencia se difunden hacia la pared corporal, donde alteran el músculo, causando daños estructurales y necrosis.
Transfiere los gusanos diariamente a una placa nueva con césped bacteriano para mantener una exposición continua a patógenos.
Coloca los gusanos sobre un gel de agarosa complementado con un agente anestesiante para anestesiarlos, y luego coloca una cubierta.
Utilizando un filtro GFP, captura imágenes de fluorescencia a intervalos regulares.
La pérdida progresiva de la señal de GFP indica una alteración muscular en C. elegans, representando necrosis muscular inducida por Aeromonas durante la interacción huésped-patógeno.
Tras cultivar las cepas de Aeromonas y ajustar la absorbancia según el protocolo de texto, localiza y esparce el caldo bacteriano en placas NGM.
Después de esto, transfiere 50 gusanos L4 a cada placa NGM. Cada 24 horas transfiere los gusanos a placas NGM frescas. Selecciona al azar 10 gusanos y transfiere a un gel de agarosa al 2% en medio M9 en una lámina.
Finalmente, coloca una cubierta sobre el gel y captura imágenes musculares con un filtro de proteína fluorescente verde en un microscopio fluorescente equipado con cámara.