Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:23 min. • March 31st, 2026
Empieza con sobrenadantes fermentados que contienen exopolisacáridos degradados y no degradados, o EPS.
Estos EPS se obtienen durante la fermentación, donde poblaciones bacterianas fecales distintas en cada sobrenadante actúan de forma diferente sobre el EPS.
Observa los sobrenadantes cerca de la base de una placa cromatografía de capa delgada prerecubierta con una fase polar estacionaria.
Seca la placa al aire y luego colócala en una cámara que contenga una fase móvil con polaridad menor que la fase estacionaria.
A medida que la fase móvil sube, los EPS migran según su polaridad y tamaño.
El EPS grande y no degradado interactúa fuertemente con la fase estacionaria y permanece cerca del origen.
Los fragmentos degradados más pequeños se unen débilmente y migran hacia arriba con la fase móvil.
Quita la placa y seca al aire.
Sumerge la placa en un reactivo que colorea los carbohidratos y que reacciona con el EPS.
Seca la placa al aire y luego caliéntala para deshidratar el EPS y formar bandas de colores.
Una sola banda cerca del origen confirma el EPS no degradado, mientras que varias bandas confirman la degradación del EPS por bacterias.
Carga 0,2 microlitros de los supernadantes fermentados sobre cada placa de aluminio 60 TLC de gel de sílice prerecubierta y haz girar para extender. Luego, usa un secador de pelo con aire caliente para secar.
Sumergir un extremo de las placas muestreadas en 20 mililitros de solución de ácido fórmico:n-butanol:agua durante varios minutos, hasta que la electroforesis se extienda casi hasta el otro extremo. Luego saca las placas con pinzas y sécalas con un secador de pelo. Luego, remojas las placas en el reactivo de orcinol durante dos minutos para que las teñan y las sequen de nuevo.
Traslada los platos a un horno para horno a 120 grados Celsius para que se calienten durante tres minutos. Luego haz fotos de la placa para evaluar la degradación del EPS midiendo las bandas TLC.