Cuantificación de la carga bacteriana intestinal en pez cebra infectado con Vibrio cholerae

Comienza con un pez cebra adulto infectado con una cepa resistente a antibióticos de Vibrio cholerae. Esta bacteria patógena expresa la enzima β-galactosidasa y coloniza el tracto intestinal.

Recoge el pez y transfiere a una solución que contenga una sobredosis de anestésico para eutanasiarlo.

Coloca el pez con el lado ventral hacia arriba y sujeciónalo con alfileres.

Desinfecta el abdomen, realiza una incisión longitudinal en la piel y dos incisiones laterales hacia la cabeza, luego sujeta la piel para exponer el tracto intestinal.

Transfiere el tracto a un tubo de homogeneización que contiene un tampón frío con cuentas de vidrio.

Incuba con agitación, permitiendo que las cuentas de vidrio alteren el tejido y liberen las bacterias.

Diluye en serie el homogeneado, lo emplacamos sobre el medio e incuba. El medio contiene un sustrato cromogénico de β-galactosidasa y un antibiótico para eliminar contaminantes.

Las bacterias expresan la enzima β-galactosidasa, que hidroliza el sustrato cromogénico, dando lugar a la formación de colonias pigmentadas de color azul.

Cuenta las colonias para estimar la carga bacteriana intestinal.

Cuando el experimento ha alcanzado su punto final deseado, toma una