Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:51 min. • March 31st, 2026
Haz un inventario de una cepa resistente a antibióticos de G. vaginalis, una bacteria anaeróbia asociada a infecciones urinarias en ratones.
Durante una infección inicial de vejiga, la E. coli uropatógena establece reservorios en quiescencia dentro de las células epiteliales de la vejiga.
La exposición posterior a G. vaginalis desencadena la desprendimiento de células superficiales mediada por toxinas, permitiendo que la UPEC latente resurja y cause infecciones urinarias recurrentes.
Para preparar el inóculo de G. vaginalis , estria el caldo sobre una placa de agar nutritivo sin antibióticos para facilitar la recuperación bacteriana.
Incubar anaerobicamente para obtener colonias en crecimiento activo.
Transfiere un bucle de colonias densas a un caldo de nutrientes sin antibióticos.
Incubar estáticamente bajo condiciones anaeróbicas hasta alcanzar la concentración bacteriana deseada.
Mide la densidad óptica para estimar la concentración.
Transfiere la suspensión a un tubo, centrifuga para pelletar la bacteria, desecha el sobrenadante y vuelve a suspender en un tampón.
Prepara las diluciones en serie y colócalas en un medio que contenga antibióticos para permitir el crecimiento selectivo de G. vaginalis y evitar la contaminación. Contar colonias para determinar la concentración del inóculo.
Empieza ciclando el G. Tensión vaginal de un caldo congelador a menos 80 grados Celsius hacia una cámara anaeróbica. Esparce las bacterias sobre una placa NYCIII sin antibióticos. Incubar la placa a 37 grados Celsius anaeróbicamente durante 24 horas.
En la cámara anaeróbica, inocúla cinco mililitros de medio anaeróbico NYCIII con un lazo de un microlitro lleno de células de la placa NYCIII, e incuba el cultivo estáticamente a 37 grados Celsius bajo condiciones anaeróbicas durante 18 horas. No incluyas antibióticos en el medio de cultivo. Determina el OD600 del cultivo usando un espectrofotómetro.
Luego, centrifugarlo a 9.600 veces g durante un minuto y aspirar el medio. Suspende el pellet bacteriano en PBS hasta la concentración deseada y diluye en serie y placa el inóculo.