Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:17 min. • March 31st, 2026
Comienza con Streptococcus pneumoniae cultivado en biofilm, un colonizador nasofaríngeo asintomático, suspendido en un tampón
Administrar la suspensión por vía intranasal a un ratón no anestesiado, permitiendo la inhalación en las vías respiratorias superiores.
En el epitelio nasofaríngeo, las bacterias establecen una biopelícula que facilita la colonización y suprime la producción de citocinas antivirales de las células hospedadoras.
Tras la anestesia, extiende la lengua del ratón para acceder a la tráquea.
Administrar el virus de la gripe A en la tráquea para infectar las vías respiratorias inferiores.
Después de que el ratón se recupere, inocular inmediatamente el virus por vía intranasal para dirigirse al tracto respiratorio superior.
La infección viral desregula el sistema inmunitario del huésped y daña el tejido mucoso, desencadenando la dispersión bacteriana hacia las vías respiratorias inferiores.
En el ambiente pulmonar alterado por el virus, las bacterias se transforman en patógenos invasores, induciendo inflamación pulmonar y propagación sistémica.
La infección también suprime la función de los neutrófilos, reduciendo la eliminación bacteriana.
Este modelo de coinfección permite investigar las interacciones huésped-microbio.
Descongela las alicotas cultivadas en biofilm sobre hielo y centrifuga a 1.700 g durante cinco minutos. Retira y descarta cuidadosamente el sobrenadante sin alterar la bola. Luego, lava el pellet resuspendiéndolo en 1 mililitro de PBS y vuelve a girarlo. Retira el sobrenadante y vuelve a suspender el pellet en el volumen necesario para alcanzar la concentración deseada.
Inocular los seis ratones negros C57 por vía intranasal con 5 veces 10 a la sexta unidad formadora de colonias o CFU, pipeteando 5 microlitros del inóculo diluido en cada naris. Tras la inoculación, sujeta firmemente al ratón, estabilizando la cabeza hasta que se inhale el volumen. Una vez que el virus se ha descongelado, dilúyelo en PBS hasta la concentración deseada.
Coloca lubricante oftálmico en los ojos del ratón antes de la anestesia. Infectar inmediatamente al ratón anestesiado con 50 microlitros de 20 unidades formadoras de placa, o PFU, del virus de la gripe A o IAV intratraquealmente, usando pinzas romas para extraer la lengua de la boca y pipetear el volumen de líquido por la tráquea. Tras la recuperación, se inoculen intranasal 10 microlitros de 200 UFP de VAI utilizando el método de inoculación descrito anteriormente.