Procesamiento de tejidos infectados para la enumeración bacteriana en un modelo de coinfección en ratones

Empieza con un ratón coinfectado con una bacteria patógena y un virus.

El virus daña el revestimiento epitelial del tracto respiratorio superior del ratón, facilitando la propagación de bacterias desde la nasofaringe hasta los pulmones.

Coloca los pulmones de ratón cosechados en un recipiente que contiene solución salina amortiguada con fosfato, o PBS.

Pica los pulmones en trozos pequeños y mezcla bien.

Transfiere la mitad del tejido pulmonar a un tubo que contiene PBS.

Coloque una sonda homogeneizadora de tejido esterilizado dentro del tubo que contiene el tejido pulmonar.

Homogeneiza el tejido para liberar las bacterias en el PBS.

Diluye el homogeneado y emplastra las diluciones en una placa de agar rica en nutrientes.

Incuba la placa para permitir la formación de colonias bacterianas.

Cuenta estas colonias para cuantificar la carga bacteriana pulmonar, que refleja la carga bacteriana en los pulmones.

Para la extracción pulmonar, usando tijeras de disección, corta los lados de la caja torácica expuesta y tira suavemente de las costillas hacia la cabeza del ratón para exponer el corazón. Inserta una aguja calibre 25 unida a una jeringuilla de 10 mililitros prellena con PBS en el ventrículo