Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:16 min. • March 31st, 2026
Empieza con un ratón coinfectado con una bacteria patógena y un virus.
El virus daña el revestimiento epitelial del tracto respiratorio superior del ratón, facilitando la propagación de bacterias desde la nasofaringe hasta los pulmones.
Coloca los pulmones de ratón cosechados en un recipiente que contiene solución salina amortiguada con fosfato, o PBS.
Pica los pulmones en trozos pequeños y mezcla bien.
Transfiere la mitad del tejido pulmonar a un tubo que contiene PBS.
Coloque una sonda homogeneizadora de tejido esterilizado dentro del tubo que contiene el tejido pulmonar.
Homogeneiza el tejido para liberar las bacterias en el PBS.
Diluye el homogeneado y emplastra las diluciones en una placa de agar rica en nutrientes.
Incuba la placa para permitir la formación de colonias bacterianas.
Cuenta estas colonias para cuantificar la carga bacteriana pulmonar, que refleja la carga bacteriana en los pulmones.
Para la extracción pulmonar, usando tijeras de disección, corta los lados de la caja torácica expuesta y tira suavemente de las costillas hacia la cabeza del ratón para exponer el corazón. Inserta una aguja calibre 25 unida a una jeringuilla de 10 mililitros prellena con PBS en el ventrículo derecho y comienza a perfundir lentamente. Busca blanqueamiento pulmonar como indicador de una perfusión exitosa.
Enjuaga lentamente para evitar romper el tejido pulmonar. Levanta el corazón con pinzas y haz un corte para separar los pulmones del corazón. Una vez separados, recoge todos los lóbulos del pulmón con pinzas y enjuágalos en un recipiente con PBS estéril para eliminar cualquier residuo de sangre.
En una placa de Petri, pica el pulmón en trozos pequeños y mezcla bien. Retira la mitad de la mezcla pulmonar para determinar la UFC bacteriana o la UFP viral y colócala en un tubo de fondo redondeado de 15 mililitros prellenado con 0,5 mililitros de PBS para homogeneización.
Para homogeneizar el tejido recogido, limpia la sonda homogeneizadora poniéndola en etanol al 70% y encendiendo el homogeneizador al 60% de potencia durante 30 segundos. Repite este paso en agua estéril durante 10 segundos.
Homogeneiza cada tejido durante 1 minuto. Para la enumeración de números bacterianos, diluciones en serie de placas en placas de agar sanguíneo. Para calcular la UFC total, utiliza 10 microlitros para placar y anota el volumen final en mililitros para cada muestra. Incubar durante la noche a 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono.