Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:04 min. • February 26th, 2026
Comienza con una placa de varios pozos que contiene un inserto de pozo recubierto de colágeno.
Añade un medio de expansión al pozo.
Los nutrientes del medio promueven la proliferación celular, mientras que los inhibidores de diferenciación mantienen un estado similar al del tallo.
Añadir una suspensión de grupos celulares epiteliales derivados de cultivos de células madre de colon al pozo, insertar e incubar.
Las células se adhieren a la superficie recubierta de colágeno y reciben nutrientes tanto del compartimento superior como del inferior.
Los inhibidores previenen la diferenciación celular y facilitan la proliferación de los grupos celulares.
Utilizando un microscopio de contraste de fase, observa el cultivo.
Una vez formada la monocapa, se sustituye el medio de cultivo por un medio fresco sin inhibidores de diferenciación celular.
Esto facilita la diferenciación de las células en células epiteliales colonicas maduras con uniones estrechas.
Estas células secretan moco y desarrollan una monocapa funcional que imita la barrera fisiológica intestinal para los estudios de interacción huésped-patógeno.
Pipete 600 microlitros de medio de expansión en el espacio bajo cada inserto. Pipetear 100 microlitros de suspensión celular desde el vial en cada inserto.
Devuelve la placa a la incubadora de cultivo de tejidos y déjala sin molestar durante al menos 12 horas. Evita sacudirla o inclinar bruscamente el plato. Tras la incubación, colocar la placa sobre un microscopio de luz de contraste de fase con una lente objetiva de 2,5 a 10 veces.
Refrescar con un medio de cultivo sin inhibidores para interrumpir el tratamiento de inhibición. Sigue refrescando el medio cada dos o tres días hasta que confluiga.