Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 4:02 min. • February 26th, 2026
Toma medios que contienen un antibiótico que bloquea la división celular.
Inocúlala con bacterias Gram-negativas en forma de bastone.
Incuba con el sacudido.
En presencia del antibiótico, las bacterias continúan creciendo sin dividirse y forman filamentos largos.
Recoge el cultivo y centrígalo a baja temperatura. Descarta el sobrenadante y lava los filamentos con una solución de sacarosa para evitar la lisis.
Descarta la solución de sacarosa.
Añade un tampón seguido de enzimas y EDTA. El EDTA debilita la membrana externa, permitiendo que la lisozima entre y descomponga la capa de peptidoglicano.
Esto elimina la pared celular, permitiendo que la célula bacteriana se reduzca. La DNasa I rompe el ADN cromosómico liberado de las células y evita la agrupación celular.
Añade una solución hipotónica con un suave giro, permitiendo que la célula absorba agua.
Las membranas flexibles permiten que la célula adopte una forma esférica llamada esferoplasto.
Transfiere una alicuota que contiene los esferoplastos en dos tubos con una solución isotónica fría para estabilizar los esferoplastos.
Para preparar esferoplastos Gram-negativos de E. coli, diluye el cultivo nocturno en una proporción de 1 a 100 en 25
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