Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:42 min. • February 26th, 2026
Tomemos un cultivo de Streptococcus del Grupo B o GBS, un patógeno bacteriano oportunista.
Diluir el cultivo en un medio fresco e incubar para obtener bacterias que se dividen activamente.
Transfiere el cultivo a un tubo cónico.
Centrifuga para pelletar las bacterias y luego descarta el sobrenadante.
Lava las bacterias con tampón.
Centrifuga de nuevo, elimina el sobrenadante y vuelve a suspender las bacterias en el tampón.
A continuación, utiliza una ratona hembra tratada con hormonas y con el epitelio vaginal cebado, más susceptible a la infección.
Sujeta al ratón. Con una punta fina de pipeta, dispensa la suspensión de GBS en la luz vaginal.
Suelta al ratón, levanta su cola y deja que las patas delanteras caminen sobre una superficie firme.
Esto favorece la retención del inóculo en la luz vaginal, facilitando la adherencia al GBS.
Inspecciona la abertura vaginal para detectar el reflujo del inóculo.
Las bacterias adheridas colonizan la superficie epitelial vaginal y establecen una infección.
El modelo murino con infección vaginal está listo para estudios adicionales.
El mismo día de la inyección, cultivar un cultivo líquido de cinco mililitros durante la noche de la cepa GBS de interés en caldo Todd Hewitt, o THB, a 37 grados Celsius.
A la mañana siguiente, subcultiva el GBS a un volumen de 1 a 10 en THB fresco para una incubación de dos a tres horas a 37 grados Celsius, hasta que las bacterias alcancen la fase media logaritaria. Luego, transfiere la subcultura a un tubo cónico estéril de 15 mililitros y centrifuga las células bacterianas. Resuspende el pellet en 200 microlitros de PBS estéril.
Luego, aumentar el volumen total de la suspensión a 1 mililitro de PBS por cada 10 ratones, para alcanzar un ODde 600 de 0,4 en un nuevo tubo de cultivo de 5 mililitros. Transfiere el cultivo a un tubo nuevo de 15 mililitros y vuelve a pelletar la bacteria. Luego, resuspende las celdas en PBS a una décima parte del volumen original.
Reserva 50 microlitros de la bacteria para dilución y plaque en serie en agar THB, para determinar la UFC exacta del inóculo. Luego, extraer 10 microlitros de GBS en una punta de pipeta de 200 microlitros con carga en gel, y asegurar manualmente la piel flácida en la nuca del primer animal entre el pulgar y el índice, seguido de la inmovilización de la cola. Inserta la punta de la pipeta entre 5 y 10 milímetros dentro del lumen vaginal y dispensa todo el volumen del inoculo.
Luego, suelta inmediatamente la nuca y levanta la cola para elevar la parte trasera del animal, mientras caminas las patas delanteras sobre una superficie dura. Tras un minuto, inspecciona visualmente la abertura vaginal para detectar algún reflujo de inóculo.