Cuantificación de la supresión de biopelículas inducida por enzimas en bacterias patógenas

Tomemos una microplaca que contiene pozos de control y tratamiento, cada uno inoculado con una bacteria patogénica formadora de biofilmes.

Los pozos de tratamiento contienen una enzima que interrumpe la formación de biofilmes.

Incubar bajo condiciones microanaeróbicas para crear un ambiente con bajo oxígeno. Esto favorece la secreción de moléculas de señalización bacteriana que median la adhesión superficial. En los pozos de tratamiento, la enzima degrada estas moléculas, reduciendo así la unión bacteriana.

Lava los pozos para eliminar las células no adherentes.

Introduce un medio fresco e incuba. Las bacterias adheridas proliferan y secretan sustancias poliméricas extracelulares, que forman la matriz de biofilm.

Quita el medio y lava los pozos.

Añade un colorante catiónico e incuba para permitir la unión a los componentes de biofilm cargados negativamente.

Lava para eliminar el tinte que no se liga.

Incuba con un disolvente bajo agitación para liberar el colorante unido en la solución.

Mide la densidad óptica o OD para cuantificar la biomasa de biofilm.

Una menor OD en los pozos de tratamiento refleja una formación reducida de biofilm, resultante de una adopción celular inicial deteriorada.