Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:06 min. • February 26th, 2026
Comienza con un cultivo de Actinomyces infectado con Saccharibacterias.
Las sacaribacterias, una bacteria parásita ultrapequeña, y su hospedador forman un cultivo binario.
Añadir una cuota del cultivo infectado a un tubo PCR que contenga reactivos de amplificación con colorante de seguimiento de electroforesis y cebadores específicos para Saccharibacteria.
Coloca el tubo en un termociclador con condiciones de PCR establecidas.
Durante la desnaturalización inicial, el calor lisa Saccharibacteria, liberando ADN genómico. Los actinomices permanecen intactos debido a las paredes celulares rígidas, limitando la liberación del ADN del huésped.
El calor desnaturaliza entonces las cadenas de ADN de Saccharibacteria y activa la polimerasa Taq.
Durante el recocido, los cebadores se unen a secuencias complementarias en el genoma de Saccharibacteria.
En extensión, la polimerasa Taq añade dNTPs a los cebadores, sintetizando nuevas cadenas de ADN.
Carga el producto de PCR amplificado sobre un gel de agarosa preteñido con un tinte que se une a los fragmentos de ADN.
Haz electroforesis y visualiza el gel bajo luz ultravioleta.
Una banda amplicon-específica para Saccharibacteria confirma la interacción huésped-parásito en el cultivo binario.
24 microlitros de la mezcla maestra PCR en un tubo de 0,2 mililitros de PCR. A un microlitro de cultivo infectado por sacaribacterias, y colocar el tubo en un termociclador.
Configura el programa de PCR tal y como se describe en el manuscrito del texto. Carga y ejecuta los productos de PCR en un gel Agros al 1%. Una banda de aproximadamente 600 bases confirmará la presencia de sacaribacterias.