Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:36 min. • February 26th, 2026
Toma un tubo con papel de filtro que contiene Listeria monocytogenes. Estas bacterias se extraen de macrófagos murinos infectados.
Añade un tampón que contenga inhibidores de RNasa para evitar la degradación del ARN, luego haz un vórtice en el tubo en varios ángulos para desalojar la bacteria.
Centrifugar y transferir la suspensión a un tubo que contenga una mezcla de fenol, cloroformo y detergente.
Se forman vórtices e incuban a una temperatura elevada para alterar las membranas bacterianas, inactivar proteínas y lisar las bacterias, liberando componentes intracelulares.
Centrifugadora para separar la fase acuosa rica en ARN de los demás componentes.
Recoge el ARN y transfiere a un tubo que contenga acetato de sodio y etanol.
Vórtice y luego incubar a baja temperatura.
El acetato de sodio neutraliza la carga negativa del ARN, mientras que el etanol y las condiciones frías promueven la precipitación del ARN.
Centrifugar para pelletar el ARN.
Retira el sobrenadante y lava el pellet con etanol frío.
Centrifuga de nuevo, quita el sobrenadante, seca al aire y añade agua libre de RNasa.
Almacena el ARN para un análisis posterior.
Descongela los tubos que contienen los filtros sobre hielo para mante
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