Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:06 min. • March 31st, 2026
Comienza con una vejiga de ratón inmovilizada y disecada, preinfectada con E. coli uropatógeno que expresa β-galactosidasa, colocada en una placa multi-pozo recubierta de silicona.
La luz de la vejiga se eleva, exponiendo las células epiteliales que contienen comunidades bacterianas intracelulares, o IBCs.
Lava la vejiga con un amortiguador para eliminar residuos y bacterias no adheridas.
Después, añade un fijador e incuba para preservar las estructuras celulares y bacterianas.
Quita el fijador y lávate con un amortiguador.
Luego, lava con un tampón que contenga detergente para permeabilizar las membranas celulares y bacterianas.
Retirar el tampón, luego añadir una solución de X-gal, un sustrato de β-galactosidasa, suplementada con reactivos redox, e incubar.
Los reactivos X-gal y redox entran en las bacterias. β-galactosidasa corta X-gal, produciendo un intermedio incoloro que es oxidado por reactivos redox para formar un precipitado azul.
Bajo un microscopio disecador, los puntos azules en la vejiga confirman los CCI, indicando una infección urinaria.
Para la enumeración IBC, tras extraer la vejiga, colócala en un pozo recubierto de silicona de una placa de 6 pozos con PBS y usa tijeras p
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