JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 2:40 min • March 31st, 2026
Comienza con un ratón anestesiado con una tapa de placa de Petri colocada bajo su abdomen para mantener la espalda horizontal.
El ratón presenta una quemadura en la espalda que ha sido infectada con Acinetobacter baumannii, un patógeno bacteriano Gramnegativo.
Las bacterias están genéticamente modificadas para portar un operón bioluminiscencia.
Colocar al ratón dentro de una cámara de imagen de bioluminiscencia mantenida a una temperatura óptima y comenzar la imagen.
En el lugar de la infección, los genes luxA y luxB del operón de bioluminiscencia codifican la enzima luciferasa. Los genes luxCDE codifican enzimas que sintetizan el sustrato de la luciferasa.
La luciferasa cataliza la oxidación del sustrato y produce luz visible, haciendo que las bacterias sean luminiscentes.
La señal de bioluminiscencia indica la presencia de bacterias metabólicamente activas en el lugar de la herida.
Utilizando software de imagen, cuantifica la intensidad de la señal de bioluminiscencia para estimar la carga bacteriana viable.
Inmediatamente después de la inoculación, realiza la imagen de bioluminiscencia iniciando el software de imagen en vivo. En el panel de control, haz clic en Inicializar. Luego espera hasta que el color de la caja de temperatura se vuelva verde, indicando que la temperatura de la etapa en la cámara de la muestra ha alcanzado los 37 grados Celsius.
Coloca al ratón anestesiado en el escenario caliente de la cámara de la muestra, con las quemaduras infectadas directamente bajo la cámara. Después, en el panel de control, pon una marca de verificación junto a "Luminiscencia".
Luego selecciona "Exposición automática" para que el tiempo de exposición para la imagen en vivo se optimice con el software de imagen en vivo según la intensidad de la bioluminiscencia. Selecciona "C" en la lista desplegable "Campo de visión". Selecciona la opción de escaneo de rango medio para que el software determine la distancia focal.
Luego pon una marca de verificación junto a la superposición. Ahora, haz clic en "Adquirir" para capturar la imagen. Luego, en la casilla "Editar etiqueta de imagen", haz clic en ok. Aparecerán una "Ventana de Imagen" y una "Paleta de Peaje". Establece los parámetros de Auto-ROI para la auto-selección.