Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:47 min. • March 31st, 2026
Comienza con una lámina perforada de microscopio y coloca una biopsia circular sobre la zona perforada.
Después, coloca una junta de goma encima.
Gira e inserta este conjunto en la sección inferior del marco de la cámara de perfusión metálica.
Alinea el marco superior con el inferior y fijalos.
Usa un calibrador para confirmar la altura uniforme de la cámara.
La cámara está conectada a una bomba, que a su vez está conectada a un depósito que contiene bacterias suspendidas en un tampón.
Inicia la perfusión de la suspensión bacteriana en la cámara.
La perforación central en la corredera permite la entrada de la suspensión bacteriana en el conjunto.
Esto permite la interacción entre las bacterias y la superficie del tejido, promoviendo la adhesión y colonización.
Esta configuración genera un modelo in vitro que imita la colonización bacteriana in vivo en el tejido.
Para comenzar el protocolo, coloca una biopsia tisular previamente preparada de 10 milímetros de diámetro y el mismo grosor entre una lámina de microscopio y una perforación circular de ocho milímetros, y una junta de goma con la superficie interna hacia arriba, para contactar con la suspensión bacteriana.
Concéntrate en la orientación del injerto de tejido mientras lo colocas en el soporte. Asegúrate de que la superficie interna del tejido ya esté expuesta al torrente sanguíneo hacia arriba para poder contactar con tu medio experimental.
A continuación, introduce el soporte con el papel en la lámina de junta que está incrustada en el marco metálico inferior de la cámara.
Fija el marco metálico superior con la lámina de junta correspondiente en la parte inferior de la recámara con el soporte de papel previamente insertado. Luego monta toda la recámara con ocho tornillos y tuercas. Asegúrate de que la altura de la cámara sea siempre la misma entre injertos usando un calibre o regla.
A continuación, conecta la cámara de flujo con una bomba peristáltica. Luego conecta el depósito de líquido de 400 mililitros con los tubos. Perfundir los tejidos con suspensiones de 100 mililitros de diez a las siete unidades formadoras de colonias marcadas con fluorescencia en solución salina amortiguada con fosfato, con el esfuerzo de tres dines por centímetro cuadrado y un caudal correspondiente de cuatro mililitros por minuto durante una hora, utilizando la bomba peristáltica y el reservorio bacteriano. Recircula continuamente la suspensión bacteriana de 100 mililitros usando el mismo depósito de recogida.