Un dispositivo microfluídico para imágenes en tiempo real y seguimiento de presión durante la formación de biopelículas

0 vistas4:35 min • February 26th, 2026

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Comienza con un dispositivo microfluídico montado en un escenario de microscopio.

El dispositivo consta de un conjunto de polímero-vidrio que encierra un microcanal con pilares cilíndricos que imitan un medio poroso.

Una bomba de jeringuilla suministra el medio de cultivo a través de una jeringuilla instalada con filtro en el canal, que drena a través de un tubo de salida hacia un contenedor de residuos.

Monitoriza la presión base del fluido usando un sensor conectado al canal.

Coloca el tubo de salida en un vial que contiene una suspensión bacteriana.

Invierte el flujo hasta que la suspensión llene el canal, mientras el filtro impide que las bacterias entren en la jeringuilla.

Incubar para permitir que las células bacterianas se adhieran a las superficies, proliferen e inicien la formación de biopelículas.

Luego, quita el filtro y vuelve la salida al contenedor de residuos.

Reanuda el flujo del medio y monitoriza la presión a medida que la biopelícula crece y bloquea el canal.

Captura imágenes microscópicas en time-lapse para visualizar el crecimiento de la biopelícula a lo largo del tiempo. Correlacionar el crecimiento de la biopelícula con los cambios de presión para estudiar el biobloqueo en medios porosos.

Comienza encendiendo la incubadora de caja del microscopio tres horas antes del experimento para asegurar una temperatura estable de 25 grados Celsius.

Conecta la tubería de entrada y salida al dispositivo microfluídico. Asegura la conexión entre el tubo y la jeringuilla insertando una aguja de 0,6 milímetros de diámetro exterior en el tubo de entrada. Coloque el dispositivo microfluídico, 30 mililitros de agua desionizada y 30 mililitros de medio de cultivo en un desecador de vacío y desgasificen durante al menos una hora.

Una vez terminado, extrae lentamente el medio de cultivo y el agua desionizada en dos jeringuillas separadas de 30 mililitros. Luego, monta el dispositivo microfluídico en el microscopio y coloca el tubo de salida en un contenedor de residuos. Conecta la jeringuilla llena de agua desionizada al canal microfluídico a través del tubo microfluídico e inyecta el agua lentamente hasta que salga por la salida del sensor de presión.

Llena el sensor de presión con agua y enjuaga todas las burbujas del tubo que conecta el canal microfluídico con el sensor de presión. Cierra la salida del sensor de presión con los tornillos dedicados al sensor de presión. Llena el resto del canal microfluídico con agua desionizada.

A continuación, coloca un filtro de 1,2 micrómetros sobre la jeringuilla del medio de cultivo. Retira la jeringuilla de agua y conecta cuidadosamente la jeringuilla al tubo microfluídico de entrada. Después de montar la jeringuilla en la bomba, enjuague el canal con el medio de cultivo a un caudal de dos mililitros por hora durante una hora.

Después, ajusta la bomba de jeringuilla al caudal deseado durante el experimento y ajusta la lectura de presión de los sensores de presión a cero. A continuación, se pipete 1 mililitro del cultivo NCIB 3610 de Bacillus subtilis con una densidad óptica de 0,1 a una longitud de onda de 600 nanómetros en un frasco de centrífuga de 1,5 mililitros. Para cargar el cultivo bacteriano en el canal microfluídico, coloca el tubo de salida en el vial de la centrífuga y espera cinco minutos para eliminar posibles burbujas de aire de la salida del tubo.

Una vez terminado, extrae 150 microlitros de solución bacteriana a un caudal de 1 mililitro por hora hasta que el canal microfluídico se llene con el cultivo bacteriano. Luego, retira cuidadosamente el filtro de jeringuilla del medio de cultivo y coloca la salida en el contenedor de residuos. Dejar las células bacterianas en condiciones de flujo cero en el canal microfluídico durante tres horas para permitir su inserción superficial en el medio poroso.

Para iniciar el experimento, inicia el flujo ajustando la bomba de jeringuilla al caudal deseado y comienza la lectura de presión en 1 hertz antes de adquirir las imágenes de las biopelículas en crecimiento en el intervalo de tiempo, configuración óptica y aumento deseados.

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Última actualización: 1 agosto 2026