Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
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Comienza con placas de bioensayo, una precolonizada en el lado izquierdo del agar nutritivo con Corynebacterium propinquum y la otra conteniendo solo agar nutritivo.
A continuación, tomemos una placa de varios pozos que contiene suspensión patógena de Staphylococcus .
Baja un sello de inoculación en los pozos, con las puntas sumergidas en el cultivo Staphylococcus .
Haz girar el sello, luego levántalo y verifica que cada punta lleve una gota uniforme para asegurar una inoculación uniforme.
Alinea el sello con el lado derecho de la placa de bioensayo, evitando el contacto con las colonias existentes.
Retira el sello, dejando manchas de inóculo de Staphylococcus en el agar.
Repite el estampado solo en la placa de agar para generar un monocultivo. Incuba las placas boca abajo.
En la cocultura, C. propinquum secreta sideróforos, pequeñas moléculas que extraen hierro del agar, inhibiendo así el crecimiento de Staphylococcus .
Después de la incubación, comparar el crecimiento de Staphylococcus en la co-cultura y en la monocultura.
La inhibición significativa en la cocultura sugiere una interacción entre ambas especies.
Tras la incubación de seis días de la placa de bioensayo, se preparan cultivos nocturnos del organismo objetivo como se describió anteriormente. Prepara la placa objetivo llenando cada pozo de una placa vacía de 12 pozos con 1,8 mililitros de BHI y 200 microlitros del cultivo objetivo durante la noche. Coloca un sello de inoculación estéril en la placa objetivo.
Gira suavemente los cultivos alrededor de los pozos, asegurándote de que no contaminen los pozos vecinos. Levanta el sello de inoculación y asegúrate de que haya una gota de cultivo blanco diluido en cada punta del sello. Coloca el sello de inoculación sobre una placa de bioensayo no inoculada y balancea suavemente el sello para que la gota de cultivo inocule cada pozo.
Una vez retirado el sello, una gota de cultivo debería verse en los pozos. Si ningún pozo está inoculado con el sello de inoculación, coloca 3 microlitros de cultivo diluido durante la noche sobre los pozos usando una pipeta. Luego, inocúla las placas de bioensayo como se ha descrito anteriormente, pero alinea las puntas del sello con el lado derecho de la placa de 12 pozos, asegurando que el sello no entre en contacto con la colonia bacteriana existente. Retira cuidadosamente el sello y colócalo de nuevo en la placa objetivo.
Si el agar se ha solidificado de forma desigual en los pozos, balancea suavemente el sello hacia adelante y hacia atrás, pero ten cuidado de no desplazar el sello hacia el crecimiento del organismo de prueba.
Repite la inoculación para cada placa de bioensayo hasta que todas estén inoculadas, y luego incuba las placas boca abajo a la temperatura adecuada durante siete días.
Tras co-cultivar la prueba y el organismo objetivo durante una semana, puntuar las interacciones basándose en una evaluación visual. Puntua los pozos con el crecimiento del organismo objetivo que muestra un crecimiento indistinguible del monocultivo como cero. Puntua los pozos con crecimiento disminuido como uno, y sin crecimiento como dos.