Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:30 min. • February 26th, 2026
Toma macetas con plántulas de tomate cultivadas en arena estéril.
Las raíces de las plántulas se inoculan con una cepa silvestre productora de celulosa o con una cepa mutante deficiente en celulosa de una bacteria patogénica de plantas.
Retira el material sellante de un recipiente, invierte el material sobre papel estéril y golpea para liberar el cilindro de arena que contiene la planta.
Divide el cilindro de arena a lo largo para exponer la raíz.
Luego, sumerge la raíz en un tampón estéril y agita para desalojar bacterias que estén flojamente adheridas.
Repite el proceso para la otra raíz.
Transfiere las raíces lavadas a un nuevo tampón. Sonicalas para liberar bacterias adheridas fuertemente.
Utiliza estas suspensiones sónicas para preparar diluciones en serie, emplatarlas sobre agar e incubarlas para permitir que bacterias viables formen colonias.
Un mayor número de viables en la cepa silvestre, en comparación con el mutante deficiente en celulosa, pone de manifiesto el papel fundamental de las fibrillas de celulosa en la promoción de la adhesión bacteriana a la superficie radicular.
Para determinar el número de bacterias viables que se encuentran en plantas cultivadas en arena, comienza retirando el material sellante de la parte superior y inferior del recipiente.
Coloca el recipiente sobre un trozo de papel estéril y golpea suavemente el recipiente contra la superficie para aflojar la arena antes de levantar suavemente la arena junto con la planta del recipiente.
Cuando el cilindro de arena y la planta estén libres sobre el papel, divide la arena por la mitad para revelar la raíz de la planta. Si lo deseas, toma muestras de arena cerca del borde del recipiente así como cerca de la raíz. Esto puede ser útil para determinar la propagación, acumulación y crecimiento de bacterias.
Recoge la raíz y elimina la arena y las bacterias que estén flojamente adheridas sumergiendo la raíz en un volumen medido de agua o amortiguador y agitando suavemente. Determina el recuento celular viable de las bacterias en la suspensión resultante colocándola en un medio adecuado como el agaro Luria. Esto representa el número de bacterias asociadas de forma vaga con la raíz. Finalmente, elimina las bacterias fuertemente unidas mediante sonicación y determina su número.