Why is null hypothesis testing critical for viable cell count comparisons?

Null hypothesis testing enables objective evaluation of whether observed differences in viable bacterial counts between wild-type and cellulose-deficient strains are statistically significant, supporting robust target validation decisions.

How does independent variable isolation improve root colonization assays?

Isolating variables such as cellulose production allows teams to attribute changes in root colonization directly to specific genetic or biochemical factors, increasing mechanistic clarity in the discovery pipeline.

What do quantitative dependent variable measurements enable in this protocol?

Quantitative measurement of viable cell counts provides reproducible data for comparing bacterial adhesion and colonization, enabling reliable assessment of intervention effects and supporting data-driven advancement decisions.

Why are replication requirements important for cross-functional collaboration?

Replication ensures that viable cell count results are consistent and reproducible across teams, facilitating cross-functional data integration and increasing confidence in portfolio-level decisions.

What statistical analysis capabilities are needed before implementing viable count assays?

Teams require statistical tools to analyze differences in viable counts, assess significance, and control for experimental variability, ensuring that assay outputs support rigorous R&D decision-making.

Evaluación de la colonización radicular de plántulas de tomate por una bacteria patógena utilizando recuentos celulares viables

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

0 views • 2:30 min • February 26th, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Toma macetas con plántulas de tomate cultivadas en arena estéril.

Las raíces de las plántulas se inoculan con una cepa silvestre productora de celulosa o con una cepa mutante deficiente en celulosa de una bacteria patogénica de plantas.

Retira el material sellante de un recipiente, invierte el material sobre papel estéril y golpea para liberar el cilindro de arena que contiene la planta.

Divide el cilindro de arena a lo largo para exponer la raíz.

Luego, sumerge la raíz en un tampón estéril y agita para desalojar bacterias que estén flojamente adheridas.

Repite el proceso para la otra raíz.

Transfiere las raíces lavadas a un nuevo tampón. Sonicalas para liberar bacterias adheridas fuertemente.

Utiliza estas suspensiones sónicas para preparar diluciones en serie, emplatarlas sobre agar e incubarlas para permitir que bacterias viables formen colonias.

Un mayor número de viables en la cepa silvestre, en comparación con el mutante deficiente en celulosa, pone de manifiesto el papel fundamental de las fibrillas de celulosa en la promoción de la adhesión bacteriana a la superficie radicular.

Para determinar el número de bacterias viables que se encuentran en plantas cultivadas en arena, comienza retirando el material sellante de la parte superior y inferior del recipiente.

Coloca el recipiente sobre un trozo de papel estéril y golpea suavemente el recipiente contra la superficie para aflojar la arena antes de levantar suavemente la arena junto con la planta del recipiente.

Cuando el cilindro de arena y la planta estén libres sobre el papel, divide la arena por la mitad para revelar la raíz de la planta. Si lo deseas, toma muestras de arena cerca del borde del recipiente así como cerca de la raíz. Esto puede ser útil para determinar la propagación, acumulación y crecimiento de bacterias.

Recoge la raíz y elimina la arena y las bacterias que estén flojamente adheridas sumergiendo la raíz en un volumen medido de agua o amortiguador y agitando suavemente. Determina el recuento celular viable de las bacterias en la suspensión resultante colocándola en un medio adecuado como el agaro Luria. Esto representa el número de bacterias asociadas de forma vaga con la raíz. Finalmente, elimina las bacterias fuertemente unidas mediante sonicación y determina su número.