Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:43 min. • March 31st, 2026
Comienza con un riñón de ratón infectado con bacterias Gram-positivas modificadas que colonizan el tejido y forman lesiones.
Todas las células bacterianas expresan fluorescencia roja, mientras que las condiciones específicas de la lesión permiten la expresión de proteínas fluorescentes verdes en células específicas.
Trata el riñón con un fijador e incuba en la oscuridad para preservar la estructura tisular y permeabilizar parcialmente las membranas celulares.
Incrusta el órgano en un medio adecuado, consígelo y seccionarlo en finas rodajas de tejido.
Coloca la rodaja sobre una lámina de vidrio cargada para que la adhieran.
Tingue el tejido con un colorante nuclear.
El tinte penetra las células del huésped y bacterianas y se une al ADN.
Coloca un engobe sobre el tejido y observa el portaobjetos bajo un microscopio de fluorescencia usando canales de imagen específicos.
La tinción nuclear perfila el ADN del huésped y el bacteriano.
Todas las bacterias del tejido expresan fluorescencia roja, mientras que la expresión de fluorescencia verde indica el lugar de interacción huésped-patógeno.
En el punto experimental adecuado, extraer el riñón, corazón, hígado, pulmones y bazo en tubos de polipropileno de 15 mililitros que contienen un 10% de formalina tamponada para una incubación de 24 a 48 horas en la oscuridad a temperatura ambiente, con suaves agitaciones o rotaciones.
Al final de la fijación, inmersa los órganos en un medio transparente para congelación de tejidos para almacenarlos a menos 80 grados Celsius. Utiliza un criostato para obtener secciones de tejido de 10 micrómetros de grosor y seca las secciones en portaobjetos de vidrio cargados y prelimpiados durante 20 minutos en la oscuridad antes de aplicar un medio de montaje duro complementado con DAPI. Luego aplica las hojas de cobertura y cura las láminas a temperatura ambiente durante la noche antes de transferir las muestras a un almacenamiento a largo plazo a 4 grados Celsius.
Para identificar lesiones dentro de las muestras, coloca una lámina en el escenario de un microscopio confocal de escaneo láser y utiliza un objetivo adecuado para visualizar células individuales y así adquirir imágenes de las lesiones.