Inmunotinción de microlesiones rellenas de bacterias en una sección de tejido cardíaco de ratón para imagen

Comienza con una lámina que contiene una sección de tejido cardíaco fijada químicamente de un ratón infectado con Streptococcus pneumoniae, una bacteria patógena.

Esta infección provoca la formación de microlesiones extracelulares llenas de bacterias dentro de los músculos cardíacos.

Lava la sección con un amortiguador para eliminar cualquier fijador residual.

Aplica un detergente no iónico para permeabilizar las membranas celulares del huésped.

Lava de nuevo para eliminar cualquier detergente que quede.

Incuba la sección con un agente bloqueante para bloquear los sitios de unión inespecíficos.

Enjuaga para eliminar el agente bloqueante que no se le liga.

Introduce un anticuerpo primario que se une al polisacárido capsular de la bacteria.

Lava para eliminar cualquier anticuerpo no unido, luego añade un anticuerpo secundario verde marcado con fluoróforo que se une al anticuerpo primario.

Contra-tinte con un colorante nuclear para marcar los núcleos de la célula huésped.

Lava la sección y móntala usando un medio de montaje.

Observa la sección con microscopía confocal para visualizar las bacterias marcadas dentro de las microlesiones.

Utilizando una sección cardíaca de 5 micras sobre portaobjetos