JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 2:03 min • February 26th, 2026
Comienza con un bazo de ratón preinfectado con bacterias patógenas.
Coloca el bazo en solución fisiológica fría amortiguada con fosfato para preservar la viabilidad bacteriana.
Usando un homogeneizador, homogeneiza el bazo para alterarlo mecánicamente y liberar las bacterias intracelulares en el tampón.
Esto genera una suspensión bacteriana que refleja la carga bacteriana total dentro del bazo.
Realizar diluciones en serie del homogeneado para reducir la densidad bacteriana en la solución y determinar con precisión el recuento bacteriano.
A continuación, toma una placa de agar nutritivo dividida en dos secciones.
Placar la misma dilución bacteriana en cada sección de la placa de agar para generar réplicas.
Deja que la placa se seque, luego invertida y incuba. Durante la incubación, las bacterias viables se multiplican y forman colonias distintas.
Cuenta las colonias de cada sección de la placa para calcular las unidades formadoras de colonias medias, o UFC, que representan la carga bacteriana total en el bazo durante la infección.
El bazo en un tubo de 15 mililitros que contiene dos mililitros de PBS. A continuación, se utilizan homogeneizadores individuales desechables por muestra para macerar los tejidos sobre hielo, seguido de una dilución en serie de las pastas tisulares.
Emplata las diluciones, en duplicado, en lados separados de una sola placa TSA y deja que las muestras se sequen brevemente. Luego, invierte las placas y cultiva las muestras en una incubadora estática a 37 grados Celsius durante la noche, promediando las colonias bacterianas de ambos lados de la placa y de cada dilución a la mañana siguiente.