Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:57 min. • February 26th, 2026
Comienza con un cultivo de Bacillus subtilis, una bacteria del suelo, cultivada en un medio rico en nutrientes.
Centrifugar para pelletar las bacterias, descartar el sobrenadante y luego volver a suspender el pellet en un medio químicamente definido que apoye la formación de biofilm.
Mide la densidad óptica del cultivo para determinar la concentración bacteriana adecuada.
Añadir el cultivo a pozos que contienen un medio definido para el control y un medio definido con un inhibidor para la prueba.
Incubar en condiciones estáticas. Las bacterias migran hacia arriba y se acumulan en la interfaz aire-líquido, donde una mayor disponibilidad de oxígeno favorece el crecimiento bacteriano.
En el pozo de control, las bacterias en la interfaz secretan componentes de la matriz extracelular y forman una biopelícula flotante conocida como película, una capa protectora que mejora la supervivencia bacteriana.
En el pozo de prueba, el inhibidor interrumpe la síntesis de la matriz, lo que resulta en poblaciones bacterianas dispersas.
Este ensayo muestra que los inhibidores bloquean la formación de biofilmes, que es una característica clave de la patogénesis bacteriana.
Primero, selecciona una colonia individual adecuada y transfierela a 3 mililitros de caldo LB. Coloca este cultivo inicial en una incubadora agitada durante 4 horas a 37 grados Celsius. Tras la incubación, toma 1,5 mililitros de cultivo inicial y centrifuga durante cuatro minutos.
Retira cuidadosamente el sobrenadante y luego vuelve a suspender el pellet en 1,5 mililitros de medio MSgg. Para cultivar películas, prepara una placa de cultivo celular de 12 pozos añadiendo 3 mililitros de MSgg a cada pozo. A algunos de estos pozos, añade MSgg con un inhibidor de molécula pequeña en un rango de concentraciones, distribuyendo la ubicación de diferentes concentraciones alrededor del plato para evitar efectos de borde.
Mide la densidad óptica a 600 nanómetros del cultivo de arranque resuspendido. La cultura debería estar entre 0,6 y 1. Esto es fundamental para la robustez del sistema.
Inocula cada pozo de la placa de cultivo con 3 microlitros del cultivo iniciador resuspendido. Luego, incuba la placa a 23 grados Celsius durante tres días en condiciones estáticas. Después, retira la placa de la incubadora y observa las películas.