Ensayo basado en fluorescencia para investigar las interacciones de los receptores de macrófagos con antígenos bacterianos

Empieza con la M, marcada como fluoróforo rojo. antígenos de tuberculosis inmovilizados sobre una cubierta recubierta de polímero.

Añade un buffer de bloqueo para bloquear sitios de enlace no específicos. Lávate para eliminar el exceso de bloqueador.

Introduce la proteína total extraída de macrófagos humanos, que incluye el receptor de la superficie celular de interés. Incubar.

Los receptores de los macrófagos se unen a los antígenos bacterianos inmovilizados.

Añade un reticulador para estabilizar los complejos receptor–antígeno, seguido de un apagador para neutralizar los reticuladores no reaccionados.

Lava y añade un segundo reticulador para reforzar los complejos.

Lávate otra vez. Luego, retira la capa de cobertura e inviertela sobre una solución primaria de anticuerpos.

Los anticuerpos se unen al receptor de los macrófagos de interés.

Lava e invierte el slip sobre una solución secundaria verde conjugada con fluoróforo, que se une a los anticuerpos primarios.

Lava y monta la funda.

Visualiza la muestra bajo un microscopio de fluorescencia. Las señales rojas y verdes co-localizadas confirman la interacción entre el receptor de macrófagos y el antígeno bacteriano.

Utilizando pinzas quirúrgic