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Microbiología
0 vistas • 2:26 min • March 31st, 2026
Toma una larva de pez cebra anestesiada en la ranura de un moho de agarosa. Su cabeza está situada hacia arriba en un ángulo para el acceso intestinal durante la inyección.
Cúbrela con agarosa de baja fusión y luego deja que la agarosa se solidifique e inmovilice la larva.
Toma una aguja de microinyección que contiene bacterias patógenas suspendidas en una solución de colorante trazante.
Bajo un estereomicroscopio, coloca la aguja en ángulo y guíala a través de la agarosa hasta la boca larval.
Avanza a través del tubo de comida hasta el intestino.
Inyecta la bacteria en la luz intestinal y confirma la administración usando el tinte trazador. Este método no invasivo, llamado microgavage, imita la vía natural de la infección.
Saca la aguja. Corta la agarosa y transfiere la larva a un medio fresco.
Las bacterias se replican y liberan toxinas que dañan el epitelio intestinal, promoviendo la invasión bacteriana y la colonización en tejidos más profundos.
El modelo de infección por pez cebra está listo para su análisis.
En una placa de agarosa al 1,5% con ranuras, coloque una gota de agarosa de baja fusión al 0,8% sobre las larvas del pez cebra para cubrirla.
Ajusta suavemente las larvas con las cabezas erguidas en ángulos de 45 grados en la ranura y las colas contra la pared de la ranura. Acciona suavemente la aguja a través de la agarosa, luego hacia la boca de las larvas de pez cebra, y a través del esófago. Una vez que la punta de la aguja está dentro del bulbo intestinal anterior, presiona el pedal de inyección para liberar entre 0,5 y 1 nanolitros de cultivo bacteriano.
Llena la luz del intestino. No dejes que se desborde del esófago o la cloaca. Retira suavemente la aguja de la boca del pez cebra. Tras el ataque de la gavage, rescata las larvas infectadas del pez cebra de la agarosa con una punta microcargadora flexible, primero cortando la agarosa y luego levantando las larvas.