Monitorización de la colonización bacteriana de raíces de Arabidopsis thaliana en un sistema sin suelo

Comienza con plántulas de Arabidopsis thaliana cultivadas sobre soportes de malla de baja densidad que flotan en la superficie de un medio líquido en un sistema sin suelo.

Estas plántulas han sido preinoculadas con bacterias que colonizan la raíz y forman una biopelícula.

Sujeta la plántula y pellizca suavemente el tallo debajo de las hojas con pinzas.

Luego, levanta la plántula de la malla sin dañar la raíz, preservando la estructura radicular colonizada.

Transfiere la plántula a una placa de varios pozos que contenga agua destilada doblemente.

Cubre la placa con papel de aluminio y sonica las muestras usando un sonicador multipuntas para alterar la biopelícula y desalojar bacterias de la superficie de la raíz.

Tras la sonicación, utiliza la suspensión bacteriana sonicada para preparar diluciones en serie.

Emplata las muestras diluidas sobre placas de agar y añade cuentas de vidrio para que las bacterias se dispersen de forma uniforme.

Retira las cuentas e incuba las placas para permitir que las bacterias viables formen colonias.

La formación de colonias confirma la exitosa colonización radicular por bacterias en el sistema sin suelo.

Después del enjuague, retira las plántulas de la malla colocando suavemente pinzas esterilizadas con llama debajo de las hojas, en el lado de la malla. Pellizca suavemente el tallo y mueve las plántulas hacia arriba y alejándolas de la malla para desalojar la raíz sin romperla. Para eliminar bacterias de las raíces de las plantas, transfiere las plántulas de cada malla a pozos individuales de una placa de sonicación de 24 pozos que contiene un mililitro de agua destilada doblemente.

Sonicar todas las muestras dentro de la placa a la vez, usando un sonicador multipuntas como se describe en el manuscrito. Para cuantificar las bacterias, se realizan diluciones seriales de 10 veces de las muestras sonicadas en un medio de crecimiento bacteriano. Extiende usando cuentas de vidrio estériles e incuba a la temperatura óptima para las bacterias hasta que las colonias individuales sean numerables.