Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:00 min. • March 31st, 2026
Comienza con células cianobacterianas fijas, inmovilizadas y permeabilizadas adheridas a una capa de cobertura.
Estas células cianobacterianas expresan proteínas reguladoras del crecimiento de baja abundancia.
Durante la imagen de fluorescencia de alta resolución, los pigmentos sensibles a la luz naturales dentro de las células cianobacterianas emiten fluorescencia de fondo.
Esto reduce la calidad de imagen al visualizar estas proteínas de baja abundancia.
Para minimizar esta fluorescencia de fondo, coloque el abrigo que contiene las células cianobacterianas en una placa de tinción.
Añade un tampón bloqueante que contenga proteínas séricas para evitar la unión de anticuerpos inespecíficos durante el procesamiento posterior y un detergente para mantener la permeabilidad celular.
Coloca el plato de tinción sobre hielo y expone las células a una luz intensa de xenón.
La luz de alta intensidad inicia el fotoblanqueamiento, descomponiendo los pigmentos fotosensibles, mientras que las proteínas reguladoras del crecimiento de baja abundancia permanecen intactas.
Las condiciones frías minimizan los daños inducidos por el calor y preservan la integridad celular.
Este proceso permite una visualización clara de proteínas de baja abundancia que regulan el crecimiento mediante inmunotinción durante la microscopía de fluorescencia de alta resolución.
Transfiere el engobe lavado al plato de tinte.
Añade 50 microlitros de buffer bloqueante en la parte superior de la cubierta. Coloca todo el plato de tinción sobre hielo y luego muévelo bajo la fuente de luz de xenón para el fotoblanqueo durante al menos 60 minutos. Después de la fotoblanqueación y el bloqueo, utiliza el borde de una toalla de papel para eliminar el buffer de bloqueo.