Detección de la susceptibilidad a antibióticos bacterianos mediante un microscopio Raman de dispersión estimulado

Comienza con muestras bacterianas pretratadas con concentraciones crecientes de un antibiótico que elimina bacterias susceptibles.

Añade un medio de crecimiento que contenga óxido de deuterio y la misma concentración de antibiótico a los tubos correspondientes.

Incuba los tubos en condiciones de agitación.

El óxido de deuterio entra en las células bacterianas, donde el deuterio se incorpora en biomoléculas recién sintetizadas, formando enlaces carbono-deuterio.

Centrifuga las bacterias, descarta el sobrenadante y lava.

Añade un fijador para preservar la estructura bacteriana.

Añade agua, centrifuga y quita el sobrenadante.

Resuspende la bacteria y transfiere la suspensión a un tapa recubierto de poli-Llisina, luego sellalo.

Coloque la muestra en el escenario de un microscopio de dispersión Raman estimulada precalibrado o SRS. Añade agua y baja el objetivo.

Adquiere imágenes de múltiples campos para evaluar la frecuencia vibracional carbono-deuterio.

A concentraciones más altas de antibióticos, la señal carbono-deuterio disminuye, lo que indica una viabilidad bacteriana reducida.

Esto permite una evaluación rápida de la susceptibilidad a los antibióticos correlacionando la intensidad de la señ