Imagen confocal de alta resolución de hemocitos infectados por Drosophila con patógenos

Coloque una lámina que contenga hemocitos fijos sobre el escenario del microscopio confocal.

Estos hemocitos se obtienen de larvas de Drosophila melanogaster y han sido infectados con un patógeno bacteriano.

Los hemocitos están marcados con proteína fluorescente verde, sus núcleos se tiñen con un colorante azul y las bacterias expresan proteína fluorescente roja para su visualización.

Configura el microscopio para detectar los tres fluoróforos y rastrear simultáneamente los compartimentos celulares y los patógenos.

Utilizando un objetivo de alta resolución, céntrate en el hemocito objetivo para captar detalles subcelulares.

Ajusta la potencia láser y las ganancias del detector para lograr una exposición adecuada de la muestra y optimizar la claridad de la señal.

Escanea varios planos Z para asegurarte de que el nivel de exposición es adecuado.

Configura las posiciones Z superior e inferior para que muestren todo el hemocito.

Utiliza zoom de escaneo para aislar el hemocito de interés y obtener una imagen 3D de alta resolución.

Este método permite visualizar la localización de patógenos dentro del hemocito.

Configura el microscopio confocal para obtener imágenes en tres colores de DAPI, EGFP y mCherry.

Coloca la muestra en el microscopio y enfoca la muestra usando un objetivo numérico de apertura 63X/1.4. Localiza los hemocitos deseados en el campo de visión para la imagen. Luego, ajusta la potencia láser y las ganancias del detector para lograr la exposición adecuada de la muestra.

Comprueba varios planos Z para asegurarte de que el nivel de exposición es adecuado para todo el grosor de la muestra. A continuación, encuentra la posición superior e inferior en el eje Z de un hemocito completo. Establece estas posiciones como las posiciones de inicio y final para la sección Z.

Utiliza el zoom de escaneo para obtener imágenes del área que contiene el hemocito. Recoge la serie de imágenes a la resolución adecuada, como 1024 por 1024 píxeles en el plano X-Y, y un espaciado de 0,3 micrómetros en la dimensión Z.