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Microbiología
0 vistas • 2:44 min • March 31st, 2026
Comienza con un inserto Transwell que contiene un cocultivo de células epiteliales y similares a copas.
Las células epiteliales forman uniones estrechas, mientras que las células similares a copas producen moco, replicando la barrera epitelial intestinal in vivo.
Toma una suspensión de la comunidad bacteriana oral que haya sido tratada con líquido intestinal simulado para imitar la digestión del intestino delgado.
Sustituye el medio de la cámara superior por la suspensión bacteriana.
Incuba con agitación para facilitar la adhesión bacteriana e interiorización.
Recoger el medio de la cámara superior que contiene bacterias no adherentes para ensayos de viabilidad posteriores.
Añade una solución disolvible de moco e incuba para solubilizar la mucosidad y liberar las bacterias adheridas.
Recoger la solución para un análisis más detallado de la viabilidad y adhesión bacteriana.
Lava las células con buffer y añade un detergente para desalojarlas.
Recoged la suspensión de la celda.
Haz un vórtice en la suspensión para lisar las células y liberar las bacterias internalizadas.
Centrifugar y recoger por separado los restos sobrenadantes y celulares para su análisis posterior.
Después de lavar y ajustar la densidad celular de la digestión del intestino delgado según el protocolo de texto, retira el medio apical del sistema transwell y añade 1,5 mililitros de la suspensión bacteriana.
Co-cultivar el sistema en condiciones generales de cultivo celular durante 2 horas. Añadir 0,5 mililitros de 10 milimolares de n-acetilcisteína en HBSS para solubilizar el moco producido por el HT29-MTX y recuperar las bacterias adheridas.
Incuba las placas a 37 grados Celsius durante 1 hora bajo agitación. Recupera el NAC-HBSS en un tubo de microcentrífuga y utiliza 1 mililitro de DPBS para lavar las células dos veces. Añade 0,5 mililitros de tritón X-100 al 0,5% encima de las monocapas y altera las células pipeteando.
Luego recupera rápidamente el líquido en el vórtice durante 1 minuto. La rapidez es crucial para evitar dañar las células bacterianas con el detergente. Analiza las muestras según el protocolo de texto.