Extracción de ADN total de hojas para la detección de infecciones bacterianas

Comienza con pequeños trozos de tejido foliar frío en los que el floema está infectado con un patógeno bacteriano.

Coloca las piezas en un mortero con nitrógeno líquido para inhibir la actividad de nucleasas degradadoras del ADN.

Haz el triturado para alterar mecánicamente las células y liberar componentes intracelulares.

Usa una espátula fría para transferir el polvo, añade un buffer de lisis y haz un vórtice en la suspensión.

Incubar para lisar núcleos de plantas y células bacterianas, liberando ADN y ARN mientras desnaturalizan proteínas.

Añade RNasa e incuba para degradar ARN.

Añade un tampón de precipitación de proteínas a las proteínas agregadas y luego centrifuga para separarlas.

Transfiere el ADN vegetal y bacteriano que contiene sobrenadante a isopropanol para precipitar el ADN en cadenas filiformes.

Centrifugadora para recoger ADN y desechar el sobrenadante.

Lava con etanol, luego centrifuga y desecha el sobrenadante.

Seca el ADN al aire, luego añade un tampón de rehidratación e incuba para disolverlo.

Las muestras de ADN ya están listas para la detección posterior de patógenos basada en PCR.

Usa tijeras limpias para cortar una hoja entera fresca de un árbol cítrico y colócala en una