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Microbiología
0 vistas • 2:28 min • August 31st, 2026
Tome un cultivo de bacterias espiroquetas modificadas genéticamente. Estas bacterias portan el gen de resistencia a la gentamicina.
Agregue una suspensión de bacteriófagos a la cultura bacteriana.
Los fagos portan ADN plasmídico que codifica un gen de resistencia a la kanamicina.
Incube la mezcla.
El bacteriófago se une a la superficie bacteriana e inyecta el ADN en la célula.
El plásmido se replica independientemente y se transmite cuando las bacterias se dividen.
Mezcle la cultura incubada con un medio de agarosa fundido suplementado con los antibióticos gentamicina y kanamicina.
Vierta la mezcla en una placa. Deje que solidifique y luego incube.
Bajo selección con doble antibiótico, solo las células que portan ambos marcadores de resistencia crecen y forman colonias, mientras que las células restantes mueren.
Seleccione una colonia e inóquela en un medio que contenga ambos antibióticos.
Incubar para facilitar el crecimiento de bacterias con el plásmido transducido para análisis posteriores.
Vierta el sobrenadante y resuspenda el precipitado en 14,5 mililitros de BSK fresco. Añada menos de o igual a 500 microlitros de muestra de fagos precipitados con PEG a la cultura del clon receptor.
Después de mezclar bien, incubar a 33 grados Celsius durante 72 a 96 horas. Realice la selección de transductantes mediante siembra en fase sólida después de mezclar con fagos precipitados con PEG, como se describe en el manuscrito. Dependiendo del fondo genético del clon receptor, verifique que las colonias aparezcan dentro del agarosa en las placas de selección tras 10 a 21 días de incubación.
Seleccione al menos de 5 a 10 colonias que crezcan en la placa en presencia de ambos antibióticos utilizando una pipeta de borosilicato esterilizada de 5,75 pulgadas con tapón de algodón e inóquelas en 1,5 mililitros de BSK con el antibiótico adecuado.